細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 |
大鼠胸大動脈平滑肌細胞 |
規(guī)格 |
1×106 |
貨號 |
BJ-X64580 |
大鼠胸大動脈平滑肌細胞
產(chǎn)品英文:A7r5
細胞培養(yǎng)條件:DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%P/S
生長狀態(tài):貼壁生長
產(chǎn)品規(guī)格:1×106
單位:T25/瓶
是否提供細胞STR鑒定:不提供STR鑒定報告
保存培養(yǎng)溫度(℃)37
運輸溫度(℃):常溫
服務描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務,細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務標準。
保存和應用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
鹽酸賽洛唑啉(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品Xylometazoline CLIAKitforVEGF-B(HumanVascularEndothelialcellGrowthFactorB)ELISAKIT人血管內(nèi)皮細胞生長因子B規(guī)格:48T/96T 大鼠纖維蛋白原γ鏈(Fgg)ELISA試劑盒 ,英文名: Fgg ELISA Kit
鹽酸賽洛唑啉質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRXylometazoline 印跡AP-BCIP/NBT底物顯色試劑盒10 人抗斑疹傷寒抗體(ai-typhus-Ab)ELISA檢測試劑盒Humanai-typhusaibodyELISAKit 96T/48T
拉坦前列素內(nèi)酯二醇質(zhì)量規(guī)格:美國進口Latanoprost Lactone Diol ELISAKitSCCAg人鱗狀細胞癌相關抗原規(guī)格:48T/96T 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒 Rat 6-K-PGF1a ELISA Kit
拉坦前列腺素內(nèi)半縮醛質(zhì)量規(guī)格:美國進口Latanoprost Lactol 小鼠DNA(胞嘧啶-5)甲基轉(zhuǎn)移酶3B(DNMT3B)ELISA試劑盒 ,英文名: DNMT3B ELISA
Kit CLIAKitforsCD14ELISAKit大鼠可溶性CD14規(guī)格:48T/96T
托吡卡胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Tropicamide rabbitTissuefactor,TFELISA試劑盒兔子組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T NADP1酸酶(NADPase)測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
奧拉西坦(標準品)質(zhì)量規(guī)格:供檢查用Oxiracetam 小鼠β防御素2(β-BD-2)ELISA試劑盒 ,英文名: β-BD-2 ELISA Kit RatMacrophageMigrationInhibitoryFactor,MIFELISA試劑盒大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸貝凡洛爾(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Bevantolol 大鼠巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA檢測試劑盒Ratmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISAkit 96T/48T HumanHeatShockProtein40,HSP-40ELISA試劑盒人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠胸大動脈平滑肌細胞鹽酸奧昔布寧(標準品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Oxybutynin HCl 人N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒 Human N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG
ELISA Kit Humanleukocyteexastase,HLEELISAKit人白細胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠腎成纖維細胞說明書 規(guī)格5×105
大鼠尿道上皮細胞培養(yǎng) 規(guī)格5×105
大鼠輸尿管上皮細胞保存 規(guī)格5×105