注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
多瘤病毒熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015214 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of
Sain L]小鼠成纖維細(xì)胞 NCTC clone 929 [L cell, L-929,
derivative of Sain L] mouse fibroblast cells MEM(NaHCO3 1.5g/L, Pyruvate 0.11g/L)+10%FBSDL-鳥氨酸鹽酸鹽(>98%,BC)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BCDL-Ornithine, mono
IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白DL-1酸(>99%,BP)質(zhì)量規(guī)格:>99%,BPDL-Tartaric acid hydrate
PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 RSC96(大鼠雪旺細(xì)胞)D-蘋果酸(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRD-Malic acid
CL-0261BC-022(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2dGTP;三1酸脫氧鳥苷鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2'-Deoxyguanosine 5'-triphosphate tri salt
IFNB1
Others Mouse 小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) dCTP;三1酸脫氧胞苷鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR2'-Deoxycytidine
5'-triphosphate di salt
MLF, 小鼠成纖維細(xì)胞外消旋N-去甲基異丙嗪質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口rac N-Demethyl Promethazine
人類成纖維細(xì)胞系;CNLMG-B5538SKIN 人肝星形細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL異丙嗪亞砜質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Promethazine Sulfoxide
人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞RNAHRPEpiC miRNA5 μg4-羥基雷美替胺質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口4-Hydroxy Ramelteon
IL2RG Others Human 人 IL2RG / CD132 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雷美替胺代謝產(chǎn)物M-II (羥基位點(diǎn)R型和S型混合物)質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Ramelteon Metabolite M-II (mixture of R and S at the hydroxy position)
大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-5(S)-?;疗丈?/span>-β-D-葡萄糖苷酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口(S)-Naproxen Acyl-β-D-glucuronide
多瘤病毒熒光PCR檢測試劑盒HGC-27(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C假茴香油素,英文名或英文縮寫:Pseudocumol,級別:AR,99%,規(guī)格:1克
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY10023-異酸酯基基三... 3-Isocyanatopropyltrimethoxysilane 15396-00-6 25G 通用試劑
FST Others Human 人 FST / Follistatin ( FS288 ) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 硼輕化;四輕硼;輕硼化 litxium borohydridq; 16949-12-8
MuM-2B 人眼脈絡(luò)色素瘤細(xì)胞十四烷shēng huà shì jì容量:1克
RD人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞 RD human maligna embryonal rhabdomyoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS97-30-3α-甲基D-葡萄糖苷alpha-D-metxylglucoside