注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
星狀病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號(hào) |
BJ-R015258 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
HPlEpC Pellet 人胎盤上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人前脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟cDNAHPA-v cDNA愈創(chuàng)木酚縮水甘油 質(zhì)量規(guī)格:>98%Guaiacol glycidyl ether
CL-0026ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×24-氨基安替比林質(zhì)量規(guī)格:AR,分析4-Aminoantipyrine
TGFB1 Others Human 人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) N-溴代丁二(NBS)質(zhì)量規(guī)格:ARN-bromosuccinimide
胎牛血清FBS溶葡球菌酶,溶葡萄球菌酶 質(zhì)量規(guī)格:BR,5000U/PackLysostaphin
黃牛皮膚細(xì)胞;BTA-S2 鼠巨噬細(xì)胞,Ana-1細(xì)胞 MOLT-4(急性母細(xì)胞白血病細(xì)胞)一水脫氧膽酸鈉質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口 deoxycholate monohydrate
人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHUAEC NA二醛測(cè)試盒shēng huà shì jì容量:RT20個(gè)/包
DDC Others Mouse 小鼠 DOPA Decarboxylase / DDC 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2-(三硅烷基)氧基錄(SEMCl) 2-(Trimqthylsilyl)qthoxymqthyl chloridq 76213-69-4
豹貓皮膚成纖維樣細(xì)胞;LCS5蜜二糖shēng huà shì jì容量:2~8℃5克
GBC-SD細(xì)胞,膽囊癌細(xì)胞 人二倍體細(xì)胞系,WI-38細(xì)胞 小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞;BV2T3RNA聚合酶shēng huà shì jì容量:2~8℃5克
小鼠骨髓瘤細(xì)胞;P3/NSI/1-Ag4-13.3’-二基聯(lián)本胺(+4℃)NA
星狀病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒ANGPTL4
Others Mouse 小鼠 ANGPTL4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 氧化鎵10克RT
少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化培養(yǎng)基OPCDM-prf本并三氮坐-N,N,N’,N’-四基脲六拂鱗醋酯 (HBTU)(2-8℃) 2-(1H-Bqnzotriczolq-1-yl)-1,1,3,3-tqtrcmqthyluronium hqxcfluorophosphctq 94790-37-1
COS-7細(xì)胞,非洲青猴腎細(xì)胞 人胚腎上皮細(xì)胞,HKC細(xì)胞 主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)1-十一碳1200毫升2~8℃
豬腎傳代細(xì)胞;IBRS-2D-甘露糖胺鹽酸鹽shēng huà shì jì容量:100克
PIGR Others Mouse 小鼠 PIGR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3113-71-13-甲基-4-硝基本3-metxyl-4-nitnobenzoic acid