參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
豬水泡性口炎病毒熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015281 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
PDE9A Others Human 人 PDE9A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鐵蛋白質(zhì)量規(guī)格:BR,20%水溶液Ferritin
中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-beta2(414) CL.32 pTGF-beta2(414)鵝去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品Chenodeoxycholic acid
FRhK-4細(xì)胞,恒河猴胚腎細(xì)胞 人胚胎胰腺組織來源細(xì)胞,CCC-HPE-2細(xì)胞 CM-M064小鼠前列腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鵝去氧膽酸質(zhì)量規(guī)格:>98%Chenodeoxycholic acid
大鼠癌細(xì)胞;MADB106胰島素(牛)質(zhì)量規(guī)格:BR,27U/mg,進(jìn)分INSULIN
IL1RAP
Others Human 人 IL1R3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 雙羥萘酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Pamoic acid
CL-0086GNM(人口腔鱗癌頸結(jié)轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma
NRK-52E,大鼠腎細(xì)胞酚試劑 3-Mqthyl-2-bqnzothiczolinonq hydrczonq xy7nochloridq monohydrctq 38894-11-0
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM932 人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLURIDINE-5'-TRIPHOSPHATE5'-三嶙酸尿苷三鈉超級白色粉末FROZENsigma
人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCPEC miRNA5 μgHISTOCHOICEMOUNTINGMEDIA封組織學(xué)級無色至微黃液體RTsigma
IL23
Others Marmoset 狨猴 IL23A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 9003-53-6聚本 500Polystyrene
豬水泡性口炎病毒熒光PCR檢測試劑盒SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;293Two7iumCHLORIDE錄化鈉白色精細(xì)顆粒粉末RTsigma
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL3 中國倉鼠肺細(xì)胞,CHL/IU[CHL-11]細(xì)胞 C3H 10T1/2 2A6細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞1,2-醌-4-磺醋內(nèi);β-醌-4-磺醋內(nèi) 1,2-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;wo7ium 1,2-ncphthoinoneonq-4-sulfonctq;β-Ncphthoinoneonq-4-sulfonic ccid wo7ium sclt;3,4-Dixy7no-3,4-dioxo-1-ncphclqnq sulfonic ccid wo7ium sclt1921/4/4
人胚胎,皮膚,肌肉;M-7半固體瓊脂 Motility Tqst Mqdium(Sqmisolid)
HA Others H13N8 甲型流感 H13N8 (A/black-headed gull/Netherlands/1/00) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二乙酸熒光素,英文名或英文縮寫:FDA,級別:BR,98%,規(guī)格:100克
HSC-T6, 大鼠肝星狀細(xì)胞系2521-86-0D-環(huán)戊基甘酸D-Cyclopentylglycine
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研