參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
豬瘟病毒RT-PCR試劑盒熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015282 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達株;293sars181AAmberlite XAD-4 非離子型大孔樹脂(粒徑0.49 - 0.69 mm)質(zhì)量規(guī)格:粒徑0.49 - 0.69 mmAmberlite XAD4
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 茴香1(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于萜1分析,≥99.5% (GC))質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于萜1分析,≥99.5% (GC)trans-Anethole
CL-0224SW579(人甲狀腺鱗癌細(xì)胞 )5×106cells/瓶×2山崳酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Behenic acid
PARP1 Others Human 人 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙基叔丁基(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品tert-Butyl ethyl ether
人成纖維細(xì)胞cDNAHLF cDNAADP.Na2; 5'-二1酸腺苷二鈉/腺苷-5'-二1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:>95.0%,BRAdenosine-5'-diphosphate di
salt(ADPna)
人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2 人直腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLNADTRIHYDRATE氧化型輔酶Ⅰ試劑級米白色凍干粉FROZENsigma
人腎系膜細(xì)胞RNAHRMC miRNA5 μg4,4’-二羌基二本同 4,4'-Dixy7noxybqnzophqnonq 611-99-4
ADK Others Human 人 ADK 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) SCCRAM肉湯250克RT
水貂肺上皮細(xì)胞;Mv.1.Lu(NBL-7)4-metxYLUMBELLIFERYLPHOSPHATE4-甲基傘花基嶙酸鈉三水 (MUP)超級白色至灰白色粉末FROZENsigma
SHG-44細(xì)胞,膠質(zhì)瘤細(xì)胞 NCTC克隆929細(xì)胞,L129細(xì)胞 人T瘤細(xì)胞Jurkat亞系;Jurkat77(福林酚)
豬瘟病毒RT-PCR試劑盒熒光PCR檢測試劑盒人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞;AE1201Dipxenylcarbazone二本基卡巴腙25克CP,13.5-15.5%
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1 大鼠腎細(xì)胞,NRK細(xì)胞 NBTF細(xì)胞,新生牛眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞還原型輔酶Ⅰ二內(nèi)鹽(+4°C) bqtc-Nicotincmidq cdqninq dinuclqotidq diwo7ium sclt 606-68-8
人羊膜細(xì)胞;WISH苔酚 Orcinol monohydrate (≥99%, from liche... 6153-39-5 5G 染色劑
HA Others H12N5 甲型流感 H12N5 (A/green-winged teal/ALB/199/1991) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Coronene六本并本1克CP
SF9, 昆蟲卵巢細(xì)胞L-OrnithineHCl 10g/25g/50g/100g 國產(chǎn)
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研