血清樣本處理過(guò)程
血清樣本處理:
1、血清細(xì)胞培養(yǎng)上清
血清細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
2、血清細(xì)胞裂解液
1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用消化血清細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。
2)收集血清細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。
3、血清
血清血清是zui常用于ELISA試劑盒檢測(cè)的一類樣本,處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒su的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA試劑盒檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免xi菌污染,因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。
4、血漿
用含血清的或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
常用的抗凝劑為EDTA、和等,檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。