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RT-PCR技術檢測步驟
日期：2025-04-04 21:23
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摘要：RT-PCR技術檢測步驟
Real-time quantitative PCR技術是指在PCR反應體系中加入熒光基團，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產(chǎn)生，通過熒光信號不斷累積而實現(xiàn)實時監(jiān)測PCR全程，然后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測出熒光到達預先設定的閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值）與病毒核酸濃度有關，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。
檢測流程檢測主要經(jīng)過取樣、留樣、保存、核酸提取、上機檢測等五個步驟：1、 取樣：用咽拭子擦拭咽后壁及雙側(cè)咽扁桃體處各5~10次，且不斷旋轉(zhuǎn)拭子；
2、 留樣：將拭子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部后立即旋緊管蓋子，進行留樣；
3、 保存：將樣品2~8℃保存，并及時送檢；
4、 核酸提取：將滅活病毒后的樣本進行核酸提?。挥糜诤罄m(xù)檢測；
5、RT-PCR核酸檢測：將提取物進行RT--PCR擴增反應，反應時間約為70~80min。