簡(jiǎn)述單層貼壁細(xì)胞的凍存流程：

1、確保細(xì)胞符合凍存標(biāo)準(zhǔn)——a) 外觀健康，形態(tài)學(xué)特征良好；b) 處于生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期；c) 無污染。

2、準(zhǔn)備凍存管，每瓶細(xì)胞準(zhǔn)備一支凍存管（凍存液配比=600μl培養(yǎng)基:300μl血清:100μl DMSO）。

3、胰酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管，準(zhǔn)備離心

4、離心時(shí)，可加適量血清（5~10%）；

5、離心完成后，去除上清液，使用1200ul培養(yǎng)基吹勻離心管內(nèi)細(xì)胞；

6、離心管內(nèi)加入600μl血清，小心吹勻，減少氣泡產(chǎn)生；

7、逐滴加入DMSO共200μl（DMSO溶于水時(shí)大量放熱，避免局部過熱導(dǎo)致細(xì)胞熱損傷），小心吹若干下，混勻液體；

8、轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸液進(jìn)入凍存管，1ml/管，共2管；

9、凍存管梯度冷凍——4℃ 0.5h；-20℃ 2h凍存至固態(tài)；-80℃冰箱或液氮罐口（亦為-80℃）過夜，第2日再將凍存管沒入液氮。或使用梯度凍存盒，常溫下放入盒中，移入-80冰箱過夜，次日沒入液氮