常用的RNA酶抑制劑簡(jiǎn)述
常用的RNA酶抑制劑:
1. 焦磷酸二乙酯(DEPC):是一種強(qiáng)烈但不徹底的RNA酶抑制劑。它通過(guò)和RNA酶的活性基團(tuán)組氨酸的咪唑環(huán)結(jié)合使蛋白質(zhì)變性,從而抑制酶的活性。
2. 異硫氰酸胍:目前被認(rèn)為是有效的RNA酶抑制劑,它在裂解組織的同時(shí)也使RNA酶失活。它既可破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)使核酸從核蛋白中解離出來(lái),又對(duì)RNA酶有強(qiáng)烈的變性作用。
3. 氧釩核糖核苷復(fù)合物:由氧化釩離子和核苷形成的復(fù)合物,它和RNA酶結(jié)合形成過(guò)渡態(tài)類(lèi)物質(zhì),幾乎能完全抑制RNA酶的活性。
4. RNA酶的蛋白抑制劑(RNasin):從大鼠肝或人胎盤(pán)中提取得來(lái)的酸性糖蛋白。RNasin是RNA酶的一種非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,可以和多種RNA酶結(jié)合,使其失活。
5. 其它:SDS、尿素、硅藻土等對(duì)RNA酶也有一定抑制作用。
因?yàn)镈EPc不加選擇的修飾蛋白質(zhì)和RNA,因此在分離和純化RNA過(guò)程中不能使用,而且它與一些緩沖液(例如Tri)不能相容,在所有RNA實(shí)驗(yàn)中,關(guān)鍵的因素是分離得到全長(zhǎng)的RNA。而實(shí)驗(yàn)失敗的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。RNA酶可耐受多種處理而不被滅活,如煮沸。
研究人員造成的污染 RNA酶主要的潛在污染源是研究人員的手。因此進(jìn)行RNA實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)勤換手套。
然而DEPC能與胺和巰基反應(yīng),所以含Tris和DTT的試劑不能用DEPC處理。