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PCR反應(yīng)出現(xiàn)假陽性解析
日期：2025-04-04 04:59
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摘要：
假陽性是指出現(xiàn)的 PCR 擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時(shí)其條帶更整齊，亮度更高。
產(chǎn)生的原因有：
①引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的 PCR 產(chǎn)物為非目的序列；
②靶序列太短或引物太短；
③靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。
解決方法有：操作輕柔，防止靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外造成污染；除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材高壓消 毒；離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時(shí)，可在加標(biāo)本前，將反應(yīng)管和試劑用紫外光照射，...
假陽性是指出現(xiàn)的 PCR 擴(kuò)增條帶與目的靶序列條帶一致，有時(shí)其條帶更整齊，亮度更高。
產(chǎn)生的原因有：
①引物設(shè)計(jì)不合適：選擇的擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列有同源性，因而在進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時(shí)，擴(kuò)增出的 PCR 產(chǎn)物為非目的序列；
②靶序列太短或引物太短；
③靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染。
解決方法有：操作輕柔，防止靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外造成污染；除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材高壓消 毒；離心管及加樣槍頭等一次性使用。必要時(shí)，可在加標(biāo)本前，將反應(yīng)管和試劑用紫外光照射，以破壞存在的核酸。