PCR反應(yīng)沒有回收到目的片段需要做什么？
日期：2024-11-22 18:38
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摘要：
PCR反應(yīng)沒有回收到目的片段需要做什么？
1、涂布未轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，如有菌落，表明氨芐霉素失效，或有氨芐抗性的雜菌污染。
2、轉(zhuǎn)化完整質(zhì)粒，計(jì)算菌落生長數(shù)，測定轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量，鋪板DNA總量是轉(zhuǎn)化反應(yīng)所用的量除以稀釋倍數(shù)。例如將1ul的質(zhì)粒（1ug/ul）用于100ul感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。再將1ul轉(zhuǎn)化后的感受態(tài)細(xì)胞稀釋至1000ul后（含有10ng DNA），用100ul鋪板（含有1ng DNA）。過夜培養(yǎng)后得到了1000個(gè)菌落。轉(zhuǎn)化率=1000菌落數(shù)×103ng/鋪板1ng DNA=1...
PCR反應(yīng)沒有回收到目的片段需要做什么？
1、涂布未轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，如有菌落，表明氨芐霉素失效，或有氨芐抗性的雜菌污染。
2、轉(zhuǎn)化完整質(zhì)粒，計(jì)算菌落生長數(shù)，測定轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化率=產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量，鋪板DNA總量是轉(zhuǎn)化反應(yīng)所用的量除以稀釋倍數(shù)。例如將1ul的質(zhì)粒（1ug/ul）用于100ul感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。再將1ul轉(zhuǎn)化后的感受態(tài)細(xì)胞稀釋至1000ul后（含有10ng DNA），用100ul鋪板（含有1ng DNA）。過夜培養(yǎng)后得到了1000個(gè)菌落。轉(zhuǎn)化率=1000菌落數(shù)×103ng/鋪板1ng DNA=106 cfu/ug。低于108cfu/ug，轉(zhuǎn)化效率低，應(yīng)重新進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)化。
3、如用pGEM-T作為陽性對照，產(chǎn)生了超過20-40個(gè)藍(lán)斑，表明載體失去T?？赡苁沁B接酶污染了核酸酶，需更換核酸酶。