RNA提取方法是Trizol法。整個(gè)過程需要佩戴口罩和手套，用的EP管和移液管槍頭都是RNAseFree的，也就是不含RNA酶的，因?yàn)镽NA酶到處都有，可隨時(shí)講解提出的RNA。

一、細(xì)胞準(zhǔn)備

我本次用的是PC-3細(xì)胞（一種前列腺癌細(xì)胞系），將細(xì)胞種于6孔板（分組情況根據(jù)情況設(shè)定）。待細(xì)胞長(zhǎng)滿后，用適量PSB洗兩次，然后將殘留的PBS吸干凈。如果怕吸不干凈，可將6孔板倒扣在吸水紙上，空干。

二、加入Trizol

將Trizol分別加入到6孔板中，每孔1mL，吹打充分裂解細(xì)胞后，將漿液轉(zhuǎn)移至1.5mL的EP管中（用不含RNA酶的EP管），靜置5分鐘后，4℃ 12000g離心5分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至新的EP管中。

注：TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì)，但不能完全抑制RNA酶活性，TRIzol中的8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇可以抑制內(nèi)源和外源RNA酶。

三、加入氯仿

加入1/5體積Trizol的氯仿（CHCl3)，我用了1mLTizol，因此這里加入了200μL的氯仿。加入氯仿后，上下翻轉(zhuǎn)混均勻，室溫下靜置5分鐘，12000g4℃離心15分鐘，然后將上清液轉(zhuǎn)移至新的EP管中（抽取過程要輕柔，避免將中間的白色沉淀抽入）。

注：氯仿是良好的有機(jī)溶劑，可以將有機(jī)相和無機(jī)相分離，被trizol裂解的細(xì)胞各種結(jié)合了酚的蛋白質(zhì)會(huì)被溶解在下層的有機(jī)相中，而RNA則在上層的無機(jī)相中。

三、加入異丙醇

加入0.5~1倍Trizol體積的異丙醇，本次我加入了500μL的異丙醇，震蕩后室溫靜置5分鐘，然后12000g4℃離心15分鐘，保留沉淀，棄上清。

這一部分目的是將RNA沉淀。

四、加入75%的乙醇

向沉淀中加入與Trizol等體積的75%的乙醇，本次加入1ml乙醇，然后7500g4℃離心5分鐘，棄上清，保留沉淀，降EP管倒扣在吸水紙上，盡量干燥。

注：這里用的乙醇是用DEPC水與無水乙醇配置的。此步驟的目的是將沉淀的RNA洗干凈。

五、加入DEPC水中溶解

將沉淀溶解于DEPC水中，一般加入30~100μL的DEPC水，可用槍頭吹打，促進(jìn)RNA的溶解，完成整個(gè)RNA的提取。再可將樣品保存在-20℃或-80℃。