PCR引物長度介紹
日期：2024-11-22 13:27
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摘要：
一般引物長度為18~30堿基?？偟恼f來，決定引物退火溫度（Tm值）zui重要的因素就是引物的長度。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。
在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃
在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃
另外有許多軟件也可以對退火溫度進行計算，其計算原理會各有不同，因此有時計算出的數(shù)值可能會有少量差距。為了優(yōu)化PCR反應，使用確保退火溫度不低于54℃的zui短的引物可獲得zui好的效率和特異性。
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一般引物長度為18~30堿基。總的說來，決定引物退火溫度（Tm值）zui重要的因素就是引物的長度。有以下公式可以用于粗略計算引物的退火溫度。
在引物長度小于20bp時：[4(G+C)+2(A+T)]-5℃
在引物長度大于20bp時：62.3℃+0.41℃(%G-C)-500/length-5℃
另外有許多軟件也可以對退火溫度進行計算，其計算原理會各有不同，因此有時計算出的數(shù)值可能會有少量差距。為了優(yōu)化PCR反應，使用確保退火溫度不低于54℃的zui短的引物可獲得zui好的效率和特異性。
總的說來，每增加一個核苷酸引物特異性提高4倍，這樣，大多數(shù)應用的zui短引物長度為18個核苷酸。引物長度的上限并不很重要，主要與反應效率有關(guān)。由于熵的原因，引物越長，它退火結(jié)合到靶DNA上形成供DNA聚合酶結(jié)合的穩(wěn)定雙鏈模板的速率越小。