胰蛋白酶純化原代細胞步驟
日期：2024-11-22 12:45
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摘要：
胰蛋白酶 純化原代細胞步驟如下：
1、在去除不需要的組織后，使用無菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4 mm小片，通過懸浮在無鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復(fù)清洗2到3次。
2、將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100 mg組織加入1ml 胰蛋白酶）。
3、在4℃孵育6到18小時，使幾乎沒有胰蛋白酶活性的酶盡可能滲透進去。
4、移棄組織碎片中的胰蛋白...
胰蛋白酶 純化原代細胞步驟如下：
1、在去除不需要的組織后，使用無菌的解剖刀和剪子把剩余的組織切成3~4 mm小片，通過懸浮在無鈣鎂的平衡鹽溶液中清洗組織碎片。讓組織碎片沉淀，去除上清液。重復(fù)清洗2到3次。
2、將盛有組織碎片的容器置于冰上，去除殘留的上清液。加入0.25%溶解在無鈣鎂的平衡鹽溶液中的胰蛋白酶（100 mg組織加入1ml 胰蛋白酶）。
3、在4℃孵育6到18小時，使幾乎沒有胰蛋白酶活性的酶盡可能滲透進去。
4、移棄組織碎片中的胰蛋白酶，在37℃孵育包含殘留胰蛋白酶的組織碎片20到30分鐘。
5、在組織碎片加入熱的完全培養(yǎng)基，用移液管輕輕地分散組織。如果使用無血清培養(yǎng)基，要加入大豆胰蛋白酶抑制劑。
6、通過無菌不銹鋼絲網(wǎng)（100～200 mm）過濾，分散所有剩余組織。計數(shù)和接種細胞，進行培養(yǎng)。