科研抗體兩種標(biāo)記法講解
日期:2025-04-04 22:10
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摘要:
科研抗體標(biāo)記法如下:
1、直接標(biāo)記法:
抗體的準(zhǔn)備:取提純的Ig溶液測(cè)定蛋白質(zhì)含量,置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液,冰槽中攪拌5~10min;
熒光素的準(zhǔn)備:按每毫克蛋白質(zhì)加0.01~0.02mg的FITC計(jì)算,準(zhǔn)確稱取后加入抗體溶液中;
標(biāo)記:邊攪拌邊加入熒光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰庫(kù)繼續(xù)攪拌12~18h;
透析:結(jié)合完畢后,先將結(jié)合物以3000r/min離心20min,除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩...
科研抗體標(biāo)記法如下:
1、直接標(biāo)記法:
抗體的準(zhǔn)備:取提純的Ig溶液測(cè)定蛋白質(zhì)含量,置于三角燒瓶中加入生理鹽水和0.5mol/L pH9.5碳酸鹽緩沖液,冰槽中攪拌5~10min;
熒光素的準(zhǔn)備:按每毫克蛋白質(zhì)加0.01~0.02mg的FITC計(jì)算,準(zhǔn)確稱取后加入抗體溶液中;
標(biāo)記:邊攪拌邊加入熒光素,避免粉末黏附于壁上,置于4℃冰箱或冰庫(kù)繼續(xù)攪拌12~18h;
透析:結(jié)合完畢后,先將結(jié)合物以3000r/min離心20min,除去少量沉淀物后裝入透析袋中再置于pH8.0緩沖鹽的燒杯中透析過夜;
過柱:取透析過夜的標(biāo)記物,過葡聚糖凝膠G-25或G-50柱,分離游離的FITC,收集標(biāo)記的熒光抗體進(jìn)行鑒定。
2、間接標(biāo)記法:
抗體的準(zhǔn)備:0~4℃下,用0.01mol/L pH8.0 PBS將待標(biāo)記的抗體蛋白溶液稀釋到濃度為30~40mg/ml,置于三角燒瓶?jī)?nèi)放入冰槽中;
熒光素的準(zhǔn)備:按每毫克蛋白質(zhì)加入0.01mg的熒光素稱取,溶解于等量的3%重碳酸鈉水溶液中;將抗體蛋白溶液與FITC溶液等量混合,在0~4℃中攪拌18~24h,充分?jǐn)噭颍煌肝龌蜻^柱層析。