冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

描述：(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株；(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶；(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
     發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項；3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
     保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮細(xì)胞株，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt，添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基，使293T細(xì)胞懸浮生長。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3） 凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二． 細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

注意事項：
1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 

油酸酰胺(>65.0%(GC))  Oleamide  質(zhì)量規(guī)格：>65.0%(GC) 英文名稱HumanBone-specificAlkphase-BELISAKit人骨特異性堿性0酸酶(ALP-B)規(guī)格：96T/48T

正辛酰胺(>98.0%(GC)(N))  n-Octanamide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N) 英文名稱HumanBrainderivedneuroophicfacorELISAKit人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

硬脂酰胺(>90.0%(GC))  Stearamide  質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC) 英文名稱HumancalcitoningenerelatedpeptideELISAKit人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)規(guī)格：96T/48T

丁基鄰苯二甲酰羥乙酸丁酯(>95.0%(GC))  Butyl Phthalyl Butyl Glycolate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumancAMPElisaKit人環(huán)-0酸腺苷(cAMP)規(guī)格：96T/48T

間苯二酸雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))  Bis(2-ethylhexyl) Isophthalate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumancarbonicanhydraseELISAKit人酶(CA)規(guī)格：96T/48T

三戊酯(>98.0%(GC))  Triamyl Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC) 英文名稱HumancardiacoponinIELISAKit人心肌肌鈣蛋白I(cTNI)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

三(2-氯乙基)酯(>97.0%(GC))  Tris(2-chloroethyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC) 英文名稱Humancardioophln-lELISAKit人心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三(1,3-二氯-2-丙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(1,3-dichloro-2-propyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumanCCL11ELISAKit人CCL11規(guī)格：96T/48T

三(2-氧乙基)酯(>95.0%(GC))  Tris(2-butoxyethyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC) 英文名稱HumanCCL17ELISAKit人CCL17規(guī)格：96T/48T

2-乙基己基二苯酯(>90.0%(GC))  2-Ethylhexyl Diphenyl Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC) 英文名稱HumanCCL1ELISAKit人CCL1規(guī)格：96T/48T
英文名稱HumanBonemorphogeneticprotein4人骨成型蛋白質(zhì)-4(BMP-4)規(guī)格：96T/48T 二芐基亞砜(>98.0%(GC))  Dibenzyl Sulfoxide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

英文名稱HumanBonemorphogeneticprotein6人骨成型蛋白質(zhì)6(BMP-6)規(guī)格：96T/48T 乙二醇二苯醚(>99.0%(GC))  Ethylene Glycol Diphenyl Ether  質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)

英文名稱HumanBonemorphogeneticprotein7人骨成型蛋白質(zhì)7(BMP-7)規(guī)格：96T/48T 十六碳酰胺(>95.0%(GC))  Hexadecanamide  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

英文名稱HumanBone-specificAlkphase-B人骨特異性堿性0酸酶(ALP-B)規(guī)格：96T/48T 油酸酰胺(>65.0%(GC))  Oleamide  質(zhì)量規(guī)格：>65.0%(GC)

英文名稱HumanBrainderivedneuroophicfacor人腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)規(guī)格：96T/48T 正辛酰胺(>98.0%(GC)(N))  n-Octanamide  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(N)

英文名稱Humancalcitoningenerelatedpeptide人降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)規(guī)格：96T/48T 硬脂酰胺(>90.0%(GC))  Stearamide  質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

英文名稱HumancAMP人環(huán)-0酸腺苷(cAMP)規(guī)格：96T/48T 丁基鄰苯二甲酰羥乙酸丁酯(>95.0%(GC))  Butyl Phthalyl Butyl Glycolate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

英文名稱Humancarbonicanhydrase人酶(CA)規(guī)格：96T/48T 間苯二酸雙(2-乙基己基)酯(>98.0%(GC))  Bis(2-ethylhexyl) Isophthalate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

英文名稱HumancardiacoponinI人心肌肌鈣蛋白I(cTNI)規(guī)格：96T/48T 三戊酯(>98.0%(GC))  Triamyl Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

英文名稱Humancardioophln-l人心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 三(2-氯乙基)酯(>97.0%(GC))  Tris(2-chloroethyl) Phosphate  質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)
小鼠前列腺上皮細(xì)胞提取物【Mouse Prostate: NormalProstate Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg

小鼠膀胱上皮細(xì)胞提取物【Mouse Bladder: Normal Bladder Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg

小鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Mouse Kidney：Normal Glomerular Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
L6：大鼠成肌細(xì)胞(分化）說明書4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。