細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
MHCC97H:高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞培養(yǎng) |
規(guī)格 |
T25m2 |
貨號 |
BJ-X63266 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、酵母。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標準。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
吲哚(standard for GC,>99.5%(GC)) Indole 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,>99.5%(GC) 人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit
辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC)) Ethyl octanoate 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC) 人Ⅰ型膠原C端肽(ICTP)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen,ICTP ELISA Kit
異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC)) 2-Ethyl-1-hexanol 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC, ≥99.5% (GC) 人Ⅰ型膠原N末端肽(X)試劑盒 Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,X ELISA Kit
棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC)) Ethyl palmitate 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99%(GC) 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(CTX-I)試劑盒 Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-I ELISA Kit
異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 2-Ethylhexanoic acid 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC) 人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)試劑盒 Human cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit
茴香醛(分析標準品,>99%(GC)) p-Anisaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,>99%(GC) 人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)試劑盒 Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit
己二酸二異辛酯(標準品) Bis(2-ethylhexyl)adipate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit
分散藍 35(標準品) Disperse Blue 35 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6/MUC1)試劑盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit
9-甲基蒽(標準品) 9-Methylanthracene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit
二甲四氯(標準品) MCPA 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 人Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)試劑盒 Human
C-telopeptide of type Ⅱ collagen,CTX-Ⅱ ELISA Kit
人8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2a)試劑盒 Human 8-iso
prostaglandin F2α,8-iso-PGF2a ELISA Kit (+)-葑酮(standard for GC, ≥99.5% (GC))
(+)-Fenchone 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC, ≥99.5% (GC)
人Ⅰ型膠原(Col Ⅰ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA Kit 吲哚(standard for GC,>99.5%(GC)) Indole 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,>99.5%(GC)
人Ⅰ型膠原C端肽(ICTP)試劑盒 Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen,ICTP ELISA Kit 辛酸乙酯(Standard for GC,>99%(GC)) Ethyl octanoate 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)
人Ⅰ型膠原N末端肽(X)試劑盒 Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,X ELISA Kit 異辛醇(standard for GC, ≥99.5% (GC)) 2-Ethyl-1-hexanol 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC, ≥99.5% (GC)
人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(CTX-I)試劑盒 Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-I ELISA Kit 棕櫚酸乙酯(standard for GC,≥99%(GC)) Ethyl palmitate 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99%(GC)
人Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)試劑盒 Human cross-linked C-telopeptides of Type Ⅰ collagen,CⅠCP ELISA Kit 異辛酸(Standard for GC,≥99.5%(GC)) 2-Ethylhexanoic acid 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,≥99.5%(GC)
MHCC97H:高轉(zhuǎn)移性肝癌細胞培養(yǎng)人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)試劑盒 Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA Kit 茴香醛(分析標準品,>99%(GC)) p-Anisaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,>99%(GC)
人Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 Human Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA Kit 己二酸二異辛酯(標準品) Bis(2-ethylhexyl)adipate 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
人Ⅱ型肺泡細胞表面抗原(KL-6/MUC1)試劑盒 Human KL-6/MUC1 ELISA kit 分散藍 35(標準品) Disperse Blue 35 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
人Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA Kit 9-甲基蒽(標準品) 9-Methylanthracene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞提取物【Mouse Brain:
Normal Aortic Smooth Muscle Cells Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
小鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細胞提取物【Mouse Brain: Normal Nerve AstrocytesDerivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg
小鼠嗅鞘細胞提取物【Mouse Brain: Normal Olfactory Bulb Ensheathing Cells Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg