細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞保存 |
規(guī)格 |
5×105 |
貨號(hào) |
BJ-X63390 |
產(chǎn)品描述:公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、公司售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
鋅試劑(≥85%(HPLC)) Zincon 質(zhì)量規(guī)格:≥85%(HPLC) 抗淬滅劑Ⅰ(活體染色持久發(fā)光)5/20毫升
1,3-二甲基-5-吡唑酮 1,3-Dimethyl-5-pyrazolone 質(zhì)量規(guī)格:0.96 離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20
氟啶胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluazinam 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 粒性白細(xì)胞染色試劑盒50
氟節(jié)胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Flumetralin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA檢測(cè)試劑盒Horseamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40ELISAKit 96T/48T
氯吡脲(標(biāo)準(zhǔn)品) Forchlorfenuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA檢測(cè)試劑盒horseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T
氯氟吡氧乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluroxypyr 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 馬球蛋白E(IgE)ELISA檢測(cè)試劑盒HorseImmunoglobulinE,IgEELISAKit 96T/48T
麥穗寧(標(biāo)準(zhǔn)品) Fuberidazole 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 貓p27核心抗原(P27)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisp27coreaigen,P27ELISAKit 96T/48T
雙氟磺草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Florasulam 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8% 貓α干擾素(IFN-α)ELISA檢測(cè)試劑盒FelisIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T
增甘膦(標(biāo)準(zhǔn)品) Glyphosine 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 貓細(xì)小病毒抗體(FPV)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T
氟鈴脲(標(biāo)準(zhǔn)品)
Hexaflumuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99% 綿羊白介素1(IL-1)ELISA檢測(cè)試劑盒SheepIerleukin1,IL-1ELISAKit
96T/48T
康奈馨完全培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 鋅試劑(AR) Zincon 質(zhì)量規(guī)格:AR
抗淬滅劑Ⅰ(活體染色持久發(fā)光)5/20毫升 鋅試劑(≥85%(HPLC)) Zincon 質(zhì)量規(guī)格:≥85%(HPLC)
離子膜通道轉(zhuǎn)運(yùn)功能檢測(cè)試劑盒20 1,3-二甲基-5-吡唑酮 1,3-Dimethyl-5-pyrazolone 質(zhì)量規(guī)格:0.96
粒性白細(xì)胞染色試劑盒50 氟啶胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluazinam 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
馬β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA檢測(cè)試劑盒Horseamyloidbetapeptide1-40,Aβ1-40 96T/48T 氟節(jié)胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Flumetralin 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
馬β內(nèi)啡肽人臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞保存(β-EP)ELISA檢測(cè)試劑盒horseBeta-Endorphin,β-EP 96T/48T 氯吡脲(標(biāo)準(zhǔn)品) Forchlorfenuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
馬球蛋白E(IgE)ELISA檢測(cè)試劑盒HorseImmunoglobulinE,IgE 96T/48T 氯氟吡氧乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Fluroxypyr 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
貓p27核心抗原(P27)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisp27coreaigen,P27 96T/48T 麥穗寧(標(biāo)準(zhǔn)品) Fuberidazole 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
貓α干擾素(IFN-α)ELISA檢測(cè)試劑盒FelisIerferonα,IFN-α 96T/48T 雙氟磺草胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Florasulam 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%
貓細(xì)小病毒抗體(FPV)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisparvovirus,FPV 96T/48T 增甘膦(標(biāo)準(zhǔn)品) Glyphosine 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
DLD-1:結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 規(guī)格T25m2
DU145:前列腺癌細(xì)胞株說(shuō)明書 規(guī)格T25m2
ECA109食管癌細(xì)胞培養(yǎng) 規(guī)格T25m2