冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
小鼠甲狀腺組織提取物【Thyroid: Normal Mouse Thyroid Derivatives】
小鼠甲狀腺位于頸部甲狀軟骨下方,氣管兩旁。甲狀腺的主要功能是合成甲狀腺,調(diào)節(jié)機(jī)體代謝。公司科技提供來自新鮮或冷凍小鼠甲狀腺組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
產(chǎn)品描述:公司科技提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠甲狀腺組織提取物 |
規(guī)格 |
50rxn/ 10μg/ 200μg |
貨號(hào) |
BJ-X64451 |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
EB (NBL-4)細(xì)胞,牛胚氣管細(xì)胞 SW 1088[SW-1088; SW1088](腦星型膠質(zhì)瘤細(xì)胞) CM-H018成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鎘黃,英文名或英文縮寫:Cadmium sulfide,級(jí)別:AR,99.5%,規(guī)格:10克
EGF Protein Mouse 重組小鼠 EGF / Epidermal Growth Factor 蛋白鱗鉬醋銨 cMMONIUM PHOSPHOMOLYBDcTq HYDRcTq 2473-94-3
MKN-28(胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)芐氧羰基甘酸,英文名或英文縮寫:CBZ-L-Gly,級(jí)別:特,99%,規(guī)格:100克
前列腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)基PEpiCMFORMALDEHYDE-FREERNAGELKIT無RNA膠試劑盒RTsigma
SELE Others Rat 大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3374-22-9DL-半胱酸;DL-2-基-3-;DL-半膀胱基酸;DL-β-;DL-脬基酸DL-Cysteine
GDNF Others Human GDNF 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
SEQUENCINGGELLOADINGDYE,3X3X核酸電泳上樣緩沖液,測(cè)序用超級(jí)暗紫色微粘稠液體COLDsigma
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL溴化鎘 CcdMiuM broMidq7789/4/6
MKN-45胃癌細(xì)胞 Human gasic cancer cells MKN-45 1640+10% FBSD-(+)-基葡萄糖鹽... D-(+)-Glucosamine (≥99%) 66-84-2 25G 通用試劑
IFNG Protein Mouse 重組小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 蛋白 (His 標(biāo)簽)N-芐氧羰基-D-本,英文名或英文縮寫:Z-D-pxenylalaninol,級(jí)別:BR,98%,規(guī)格:10克
NCI-H157(非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 SRSV/3T3(SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞)(L-抗壞血酸,維生素C)
A9(小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/mL,基體:水)Saccharin salt solution質(zhì)量規(guī)格:1.00mg/mL,基體:水
PVRL2 Others Human CD112 / Nectin-2 / PVRL2 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 桃醛(標(biāo)準(zhǔn)品)γ-Undecanolactone質(zhì)量規(guī)格:0.96
水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S5甲基壬基甲酮(標(biāo)準(zhǔn)品)2-Undecanone質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
DKKL1 Others Human DKKL1 / Soggy-1 / SGY-1 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 2′-脫氧胞苷 鹽酸鹽2′-Deoxycytidine 質(zhì)量規(guī)格:0.99
膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mL1酸氫二銨Ammonium phosphatedi basic質(zhì)量規(guī)格:SP
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.小鼠甲狀腺組織提取物研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。