細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
β-巰基乙醇 |
規(guī)格 |
100ml |
貨號(hào) |
BJ-X64904 |
β-巰基乙醇
英文名稱:β-巰基乙醇
規(guī)格:100ml
服務(wù)描述:
公司提供委托細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù),細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。公司科技提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項(xiàng):
1. 接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
西多福韋質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Cidofovir RatBonemorphogeneticprotein4,BMP-4ELISA試劑盒大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 倉(cāng)鼠白介素1β(IL-1β)試劑盒 Hamster Ierleukin 1β,IL-1β ELISA Kit
4-氨基-5-咪唑甲酰胺質(zhì)量規(guī)格:>98%(滴定)5-Amino-4-imidazolecarboxamide 小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 CLIAKitforPTHrPELISAKit大鼠甲狀旁腺相關(guān)蛋白規(guī)格:48T/96T
TNP 470/O-(氯乙酰氨甲?;?span>)煙曲霉素醇 質(zhì)量規(guī)格:≥97%AGM-1470 Rat plasmin aiplasmin complex (PAP) ELISA Kit 大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒 石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O直接染色試劑盒50
?;鞘懰徕c(進(jìn)分)質(zhì)量規(guī)格:≥97%進(jìn)口分裝 taurolithocholate
HumanLongactingthyroidstimulator,LATSELISAKit 長(zhǎng)效甲狀腺刺(LATS)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 ELISAKitOFQ/N孤腓肽規(guī)格:48T/96T
殺螟丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)Aramite
solution質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=3% Mouseα2-Aiplasmin,α2-APELISA試劑盒小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 胎盤蛋白(PP)ELISA試劑盒 ,英文名: PP ELISA Kit
Amberlite?IRA402 強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂(氯型)Amberlite? IRA402質(zhì)量規(guī)格:氯型 小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 MouseypsinELISA試劑盒小鼠胰蛋白酶(ypsin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Amberlite XAD-1180N 非離子型多孔樹脂(粒徑0.350 - 0.600 mm)Amberlite® XAD1180N質(zhì)量規(guī)格:粒徑0.350 - 0.600 mm Rat platelet aibodies IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 Duckviruseeritis,DEVELISA試劑盒鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
嘧菌酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Azoxystrobin質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品 Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit 促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝 HumanAndrostenedione,ASDELISAKit雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
結(jié)腸MatchPair?: β-巰基乙醇結(jié)腸上皮細(xì)胞和腫瘤原代細(xì)胞保存 規(guī)格5×105
結(jié)腸MatchPair: 結(jié)腸上皮和腫瘤組織提取物【Colon MatchPair: Normal Human Colonic Epithelial Derivatives and Colonic Tumor Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 10μg/ 200μg
角膜上皮細(xì)胞提取物【Human Eye: Normal Corneal Epithelial Cells Derivatives】 規(guī)格50rxn/ 5μg/ 200μg