細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 |
PATU8988t(PATU8988)細胞 |
規(guī)格 |
詳見說明書 |
貨號 |
BJ-99462 |
服務(wù)描述:
公司提供委托細胞培養(yǎng)服務(wù),細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:
客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。公司科技提供的細胞有標(biāo)準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右完全培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司科技售后服務(wù)標(biāo)準。
保存和應(yīng)用:
客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研。
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1) 準備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實驗需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細胞懸浮生長。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精(建議配置75%的酒精的水是過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
干細胞成脂分化潛力定性染色試劑盒20/100 抑霉唑標(biāo)準溶液(100μg/ml,u=2%) Imazalil solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=2%
ELISAKitapo-A1人載脂蛋白A1規(guī)格:48T/96T 環(huán)草隆(標(biāo)準品) Siduron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品
小鼠醌NADH脫氫酶1(NQO1)ELISA試劑盒 ,英文名: NQO1 ELISA Kit 西瑪津(標(biāo)準品) Simazine 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品
人胃粘液素(GM)ELISA檢測試劑盒HumanGasicMucin,GMELISAKit 96T/48T 西瑪津標(biāo)準溶液(10μg/ml,u=5%) Simazine solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=5%
大鼠血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒 Rat Fibrinogen Degradation Product,FDP ELISA Kit 辛硫磷標(biāo)準溶液(100μg/ml,u=4%) Phoxim solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4%
英文名稱RatTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡELISAKIT大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsRⅡ)規(guī)格:96T/48T 辛硫磷標(biāo)準溶液(10μg/ml,u=6%) Phoxim solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=6%
甘油(glycerol)含量酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒20 標(biāo)準溶液(10μg/ml,u=4%) Pirimicarb solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=4%
ELISAKitPGR人孕同受體規(guī)格:48T/96T 吡嘧磺隆(分析標(biāo)準品,99%) Pyrazosulfuron 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品,99%
小鼠跨膜絲酸蛋白酶2(TMPRSS2)ELISA試劑盒 ,英文名: TMPRSS2 ELISA Kit 丙草胺(分析標(biāo)準品,97.5%) Pretilachlor 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準品,97.5%
人脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA檢測試劑盒HumanBromodeoxyuridine,BrdUELISAKit
96T/48T 丙草胺標(biāo)準溶液(10μg/ml,u=2%)
Pretilachlor solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%
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TAK-632 10mg Pseudomonas viridiflava黃假單胞菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
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1228591-30-7 TAK-632 50mg Pseudomonas tolaasii托拉斯假單胞菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
1228591-30-7 PATU8988t(PATU8988)細胞 TAK-632 5mg Pseudopezicula tracheiphila葡萄角斑葉焦病菌PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
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AM966 10mg Pseudomonas syringae pv. theae丁香假單胞桿菌茶致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度
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