注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱	禽流感/新城疫病毒(AIV/NDV)核酸試劑盒實驗步驟
英文名稱	詳見說明
貨號	BJ-R015083

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點：

◇高特異性：與其他病毒無交叉反應(yīng)，無非特異性擴(kuò)增；

◇高靈敏度：檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝；

◇操作簡便：該系列所有試劑均采用相同的體系和條件，可同時進(jìn)行多個檢測；

◇高通量：多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實驗過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1（10pM）               2μl

      引物2（10PM）              2μl

      Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

     加ddH2O至               50 μl

     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

注：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數(shù)秒后使用。

1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）

待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關(guān)說明書；陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取，可直接使用。

2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備（PCR前準(zhǔn)備區(qū)）

取N個（N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品）PCR反應(yīng)管，每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。

禽流感/新城疫病毒(AIV/NDV)核酸試劑盒實驗步驟組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。

1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s，轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

2.加樣（樣本處理區(qū)）

3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-12(rabbit MMP-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Oxododecanedioic acid  30828-09-2  中文名：  分子式：C12H20O5  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Methyl-2-propyl-1H-benzimidazole-6-carboxylic acid  中文名：  分子式：C12H14N2O2  度：98.0%

兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-2  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S 

兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1   英文名稱：   Rabbit Maix Metalloproteinase 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MMP-1  5-Chlorothiophene-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C5H3ClO2S  度：98.0%

兔基質(zhì)金屬蛋白9（MMP-9）ELISA試劑盒     4-O-(3-nitropropanoyl)corollin  122475-42-7  中文名：  分子式：C18H24N4O18  度：%  關(guān)鍵詞：

7-羥基-3-羧酸(>98.0%(HPLC))  7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC) Rat macrophage migration inhibitory factor (MIF) ELISA Kit 大鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒

7-二乙氨基-4-甲基(>98.0%(GC)(T))  7-Diethylamino-4-methylcoumarin  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) Humanmyelinassociatedglycoproteinaoaibody,MAGELISAKit 人抗髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

甲基鈣黃綠素藍(lán)水合物[用于配位滴定銅時的指示劑]  Methyl Calcein Blue Hydrate  質(zhì)量規(guī)格：用于配位滴定銅時的指示劑 Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin1,AFP-L1ELISA試劑盒人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

6,7-亞甲二氧基-4-甲基-3-馬來(>98.0%(HPLC)(N))  6,7-Methylenedioxy-4-methyl-3-maleimidocoumarin  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N) 植物氨含量光譜法定量檢測試劑盒20

4-甲基-6,7-亞甲基二氧代(>99.0 %(GC))  4-Methyl-6,7-methylenedioxycoumarin  質(zhì)量規(guī)格： >99.0 %(GC) Mouse17-Hydroxycoicosteroids,17-OHCSELISAKit小鼠17羥皮質(zhì)類(17-OHCS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

7-甲氧基-3-羧酸(>98.0%(GC)(T))  7-Methoxycoumarin-3-carboxylic Acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T) 小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA試劑盒 ，英文名： ENG/sCD105 ELISA Kit

溶劑綠 7(>85.0%(E))  Pyranin  質(zhì)量規(guī)格：>85.0%(E) 大鼠維生素D2(VD2)ELISA檢測試劑盒RatVitaminD2,VD2ELISAKit 96T/48T

磺酰熒光素(>75.0%(HPLC)(T))  Sulfonfluorescein  質(zhì)量規(guī)格：>75.0%(HPLC)(T) 人蛋白酪氨酸0酸酶自身抗體試劑盒 Human Tyrosine Phosphatase Aoaibodies ELISA Kit

N-琥珀基-7-羥基-3-羧酸酯(>95.0%(HPLC)(T))  N-Succinimidyl 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylate  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T) RatPeosidineELISAKit大鼠戊糖素(Peosidine)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

N-琥珀基-7-甲氧基-3-羧酸酯(>98.0%(HPLC)(N))  N-Succinimidyl 7-Methoxycoumarin-3-carboxylate  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N) GMS10甲基化基因電轉(zhuǎn)感受態(tài)5X100微升

Human thymus leukemia aigen (TLa) ELISA Kit 人胸腺白血病抗原(TLa)ELISA試劑盒  (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone  中文名：(R)-4-芐基-2-惡唑烷酮  分子式：C10H11NO2 

Human thymus independe aigen (TI-Ag) ELISA Kit 人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)ELISA試劑盒  (R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙?；?span lang="EN-US">-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3 

Human thymus expressed chemokine (TECK/CCL25) ELISA Kit 人胸腺表達(dá)趨化因子(TECK/CCL25)ELISA試劑盒  (R)-(+)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol  86695-06-9  中文名：(R)-(+)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇  分子式：C17H21NO 

Human thymus depende aigen (TD-Ag) ELISA Kit 人胸腺依賴性抗原(TD-Ag)ELISA試劑盒  (-)-Noe's Reagent  108031-79-4  中文名：(-)-核歐沃豪斯效應(yīng)試劑  分子式：C24H38O3 

Human thymus activation regulated chemokine (TAFA/CCL17) ELISA Kit 人胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)ELISA試劑盒  (2Z,6Z,10E,14E,18E)-Farnesylfarnesol  90695-03-7  中文名：  分子式：C30H50O