注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
巴貝斯蟲熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015204 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
NCI-H1650細胞,人肺支氣管癌細胞 小鼠前列腺癌細胞,RM-1細胞 CM-R031大鼠腸動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL比卡魯胺(標準品)Bicalutamide質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
Raji(人Butt's瘤細胞) 5×106cells/瓶×2白消安Busulfan/Myleran質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,可用于細胞培養(yǎng)
Promocell C-28050 DC Generation Medium, 樹突狀細胞**培養(yǎng)基(即用型) 250ml白消安(標準品)Busulfan/Myleran質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
人骨髓間充質(zhì)干細胞(hMSCs)洛莫司汀Lomustine質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
TNFRSF12A
Others Human 人 TNFRSF12A / FN14 / TWEAKR 人細胞裂解液 (陽性對照) 洛莫司汀(標準品)Lomustine質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細胞;JEG-3-VP16-TNFa 大鼠肝實質(zhì)細胞完全培養(yǎng)基 100mLD-XYLOSED-木糖美國藥典級 5 KG
鯉魚尾鰭細胞;YZ161-(2-拂本基), 99% 1-(2-Fluorophqnyl)pipqrczinq 1011-12-0
人支氣管平滑肌細胞 (HBSMC)( 5×105 )流醋 McgnqsiuM Sulphctq 7487-88-9
CL-0268COLO 201(人結(jié)直腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2Gumbenzoin安息香浸膏10克AR,99%
人低侵襲性脈絡膜色素素瘤細胞;OCM-1A 大鼠腦動脈血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL草酸二乙酯;乙二酸二乙酯;草酸乙酯Dietxyl oxalate;Dietxyl
ethanedioate;Oxalic acid dietxyl ester
巴貝斯蟲熒光PCR檢測試劑盒SW 982(人滑膜肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2滂胺天藍1克
HK-2(人腎小管上皮細胞) 5×106cells/瓶×2 MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 人胚肺成纖維細胞;WI-38 [WI38]5-羌基吲哚醋(+4℃) 5-xy7noXYINDOLq-3-cCqTIC cCID 24-16-0
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0910AGAROSELF大片段瓊脂糖(脈沖電泳)(原Agarose Ⅲ)脈沖電泳級
ENPP7 Others Mouse 小鼠 ENPP7 / NPP-7 人細胞裂解液 (陽性對照) 錄胺Tshēng huà shì jì容量:1克
MV3 人色素瘤細胞PVP-K30 100g/250g/1kg JAPAN