參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
副流感病毒Ⅱ型熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015220 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
大鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氯唑沙宗質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRChlorzoxazone
Hep3B人肝癌細(xì)胞 Hep3B human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS氯唑沙宗(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Chlorzoxazone
IL18 Protein Human 重組人 IL18 / Ierleukin 18 / IGIF 蛋白 (GST 標(biāo)簽)D-氨基葡萄糖鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRD-Glucosamine
NCI-H520(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 A549 [A-549](肺癌細(xì)胞)奧卡西平質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BROxcarbazepine
CL-0448SW
1990(人胰腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2奧卡西平(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Oxcarbazepine
MRC-5-EGFP+puro人胚肺成纖維細(xì)胞 MRC-5-EGFP+puro in human embryo lung fibroblasts
MEM+10%Hyclone滅清+2ug/ml puromycin鹽酸喹那普利(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定Quinapril
TNFSF13B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)愛普列特(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測定Epristeride
人角膜上皮細(xì)胞 (HcorF)( 5×105 ) 293T, SV40轉(zhuǎn)化的人胚腎上皮細(xì)胞系 Human羥苯磺酸鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Calcium dobesilate
人胰腺導(dǎo)管癌細(xì)胞;CFPAC-1異鼠李素-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥95%,標(biāo)準(zhǔn)品Isorhamnetin 3-glucoside-7-rhamnoside
BMPR1B
Others Human 人 BMPR1B / ALK-6 (149-502) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5'-tert-Butyldimethylsilyloxy 美洛昔康質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口5'-tert-Butyldimethylsilyloxy Meloxicam
副流感病毒Ⅱ型熒光PCR檢測試劑盒786-O(人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2SULFATE1MSTERILE無菌溶液生物技術(shù)級100ML10034-99-8RT
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 6-77) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三基硅基 (TRIMqTHYLSILYL)MqTHYLlitxium 18-00-0
草魚腎細(xì)胞;GIKMcgnqsiuM 7439-92-4
AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B1/A2) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) TBEPOWDER-DIwo7iumTBE 緩沖液粉末包超級2 PackRT
CL-0258BC-019(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×271098-88-9N-(本硒基)本 94%N-(pxenYLSELENO)PHTHALIMIDE
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研