參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
甲型流感 / 乙型流感 / 丙型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號(hào) |
BJ-R015227 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測(cè)靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測(cè);
◇高通量:多種雙重PCR檢測(cè)以及三重PCR檢測(cè)試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動(dòng)化核酸提取儀等,具體提取方法請(qǐng)參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
IL3RA Others Human 人 IL3RA / CD123 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 葡萄糖-6-1酸脫氫酶,硫酸銨懸浮液質(zhì)量規(guī)格:酶活>200 NADP units/mg,BCGlucose-6-phosphate dehydrogenase
CM-H022人前列腺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml,BC)質(zhì)量規(guī)格:>12,000U/ml,BCMalate dehydrogenase
BBOX1 Others Human 人 BBOX1 / Gamma-BBH 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 草甘膦標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=2%)質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=2%N-(Phosphonomethyl)glycine solution
支氣管成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)辛(分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%Phoxim
恒河猴腎細(xì)胞;RM-1 人胰腺癌細(xì)胞,HPAC細(xì)胞 SGC-7901(胃腺癌細(xì)胞)除草標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5%)質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=5%Nitrofen solution
人微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHDMEC miRNA5 μgβ-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸 3'-1酸鈉鹽水合物質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口β-Nicotinamide adenine dinucleotide
3'-phosphate salt hydrate
PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 腺嘌呤鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Adenine
家兔腎細(xì)胞;RABK3硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口Thionicotinamide adenine dinucleotide
HIC細(xì)胞,人小腸癌細(xì)胞系 熒光素酶轉(zhuǎn)染人成骨肉瘤細(xì)胞,U2OS-Luc teT-on細(xì)胞 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T](R)-9-[2-(二乙基1?;籽趸?/span>)丙基]腺嘌呤質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口(R)-9-[2-(Diethylphosphonomethoxy)propyl] Adenine
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×27-二去甲基米諾環(huán)素二鹽酸質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口7-Didemethyl Minocycline Di
甲型流感 / 乙型流感 / 丙型流感病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒HuT 78(人T細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2蘋果酸脫氫酶測(cè)試盒(測(cè)組織)100支/包
6T-CEM (人T細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H075人腎足突細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人結(jié)膜成纖維細(xì)胞RNAHConF miRNA5 μg四氮坐醋 1H-Tqtrczolq-1-ccqtic ccid 173-17-
CM-R063大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL血清兔抗人IgG,F(ab)21公斤RT
EPHA3 Others Mouse 小鼠 EphA3 (aa 569-984) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) TG-SDS-BUFFER,10XREADY-PACKTG-SDS緩沖液, 干粉蛋白組學(xué)級(jí)白色粉末RTsigma
大鼠小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞RA-c4-溴-1-硝基本1-Bromo-4-nitnobenzene
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研