參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
榛子熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015264 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進(jìn)行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
CL-0456TM4(正常小鼠Sertoli細(xì)胞)5×106cells/瓶×2質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide
SIGIRR Others Human 人 SIGIRR / TIR8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) TMS-咪唑(=N-基硅基咪唑)(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)
人膀胱基質(zhì)成纖維細(xì)胞RNAHBdSF miRNA5 μgN,O-雙(硅基)乙酰胺(>75.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>75.0%(GC)N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide
T24細(xì)胞,人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 大鼠肝癌細(xì)胞(wistar 大鼠),CBRH7919細(xì)胞 RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元巴氯芬(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Baclofen
Ishikawa(人內(nèi)膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2巴洛沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:> 98%,水合物標(biāo)準(zhǔn)品Balofloxacin Dihydrate
GDNF Others Rat 大鼠 GDNF 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 7-乙基喜樹堿(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品7-Ethylcamptothecin
CL-0347HCC38(人導(dǎo)管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×27-乙基喜樹堿質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR7-Ethylcamptothecin
COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MCF7細(xì)胞 PT67(小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞)(-)-Blebbistatin質(zhì)量規(guī)格:>98%(-)-Blebbistatin
人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細(xì)胞;C918奈達(dá)鉑;順糖氨鉑質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRNedaplatin
OSMR
Others Human 人 OSMR / IL31RB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 5-磺基水楊酸質(zhì)量規(guī)格:ARsulfosalicyclic acid
榛子熒光PCR檢測試劑盒CL-0324BT-20(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2無水嶙酸二鉀,英文名或英文縮寫:potewwium phosphate dibasic,級別:CP,98%,規(guī)格:10克
ROR1 Others Human 人 ROR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2-拂-5-氧基本全 2-FLUORO-5-MqTHOXYBqNZcLDqHYDq 10278-90-3
人表皮色素細(xì)胞-深色素總RNAHEM-d NA復(fù)紅,英文名或英文縮寫:Fuchsin acid,級別:BR,75%,規(guī)格:1克
盤羊皮膚細(xì)胞;ASHS2 中國倉鼠二氫葉酸還原酶缺陷細(xì)胞,CHO/dhFr-細(xì)胞 Ca763細(xì)胞,615小鼠癌瘤株結(jié)晶硅,英文名或英文縮寫:Silicon,級別:AR,99%,規(guī)格:5克
轉(zhuǎn)化細(xì)胞2386-54-1丁烷磺酸鈉wo7ium 1-butanesulfonate
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研