注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應體系與反應條件。產(chǎn)品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
植物源性成分熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015266 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。
MCF7細胞,癌細胞 人肝癌細胞,QGY-7701細胞 T-108B膠原酶(含100mL酶解緩沖液)10mL4-羥苯基馬拉維若質量規(guī)格:美國進口4-Hydroxyphenyl Maraviroc
化大家鼠肺成纖維細胞;NRm依澤替米貝酮質量規(guī)格:美國進口Ezetimibe Ketone
EFNA1 Others Human 人 EFNA1 / Ephrin-A1 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-O-乙酰依澤替米貝質量規(guī)格:美國進口3-O-Acetyl Ezetimibe
胰腺星狀細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)依澤替米貝羥基β-D-葡萄糖苷酸 質量規(guī)格:美國進口Ezetimibe Hydroxy β-D-Glucuronide
APOA1
Others Mouse 小鼠 ApoA1 人細胞裂解液 (陽性對照) 木栓酮(標準品)質量規(guī)格:鑒別FRIEDELIN
人脂肪細胞-內臟(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞 HumanPUC19質粒1克RT
人急性母細胞性白血病細胞;MOLT-41-炔基環(huán)己1 99% 1-qTHYNYLCYCLOHqXqNq 931-49-7
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 馬血清25克
CM-H110人皮膚肥大細胞完全培養(yǎng)基100mLPEROXIDASE,HORSERADISH,RZ1.0辣根過氧化物酶試劑級紅褐色至褐色粉末FROZENsigma
5-8F, 人高轉移鼻咽癌細胞系 瘤,EL4IL-2細胞 PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤)144432-85-93-錄-4-扶本硼酸3-Chloro-4-fluoropxenylboronic acid
植物源性成分熒光PCR檢測試劑盒人臍帶動脈內皮細胞 (HUAEC)( 5×105 )碳酸錳25克
CM-H088人腹膜內皮細胞完全培養(yǎng)基100mL-5-羥色胺肌酐 Serotonin creatinine sulfate salt mono... 61-47-2 100MG 通用試劑
BALB/C小鼠肝上皮細胞;BNL 1ME A.7R.1 小鼠小腸粘膜上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL三拂磺醋亞鐵 IRON(II) TRIFLUOROMqTHcNqSULFONcTq 29163-91-6
RSC, 大鼠雪旺細胞 Rattus鎘1克
EPHB4 Others Mouse 小鼠 EPHB4 / HTK 人細胞裂解液 (陽性對照) 測序分離膠NA