參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
豬傳染性胃腸炎病毒定量RT-熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015270 |
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。
RS1(大鼠皮膚成纖維樣細胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(人單核細胞)梓醇(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Catalpol
CL-0116HSC-T6(大鼠肝星形細胞)5×106cells/瓶×2紫草素,紫草素(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Shikonin
RK1 Others Rat 大鼠 kA / RK1 人細胞裂解液 (陽性對照) 紫草酸(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Lithospermic acid
人內(nèi)皮細胞裂解物HLECL紫丁香酚苷(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品Syringin
A2780/Taxol細胞,人卵巢癌紫杉醇耐藥株 鼠腹水單核細胞瘤,J774A.1細胞 前列腺癌組織源性原代細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)/1ml竹節(jié)參皂苷IVa(標準品)質(zhì)量規(guī)格:供含量測定用chikusetsu saponin Iva
人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細胞;MuM-2B血清兔抗BSA10克RT
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Viet Nam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 酰輔酶A 內(nèi)鹽 ≥93% (HPLC) (-20℃) ccqtyl coqnzymq c wo7ium sclt 1009-73-
MDA-MB-436 人腺癌細胞葡聚糖凝膠 Sephade... Sephadex G-50 Fine 9048-71-9 100G 分離試劑
NCI-H358人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBSwo7iumGluconate葡萄糖酸鈉白色至微黃色精細結(jié)晶RTsigma
KITLG
Protein Human 重組人 SCF / C-kit ligand 蛋白 (aa 1-189, His 標簽)(甘油)
豬傳染性胃腸炎病毒定量RT-熒光PCR檢測試劑盒rRTEC, 大鼠腎小管上皮細胞錄化亞銻,英文名或英文縮寫:Antimony(III)chloride,級別:CP,規(guī)格:10克
ENPP2 Others Human 人 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 人細胞裂解液 (陽性對照) 氧化鎢銨 Ammonium metatungstate hydrate,≥99.0% 174501-64-5 25G 通用試劑
大鼠嗅鞘細胞完全培養(yǎng)基 100mL1醋 ≥99%(2-8℃) LIGNOCqRIC cCID 227-29-2
DH82狗腎惡性組織細胞增生癥細胞 DH82 dog kidney maligna histiocytosis cells MEM培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS曙紅Y(水溶)shēng huà shì jì容量:100克
IFNA5
Protein Human 重組人 IFNA5 / IFNaG / Ierferon alpha-G 蛋白 (Fc 標簽)9025-35-8α-半乳糖苷酶(+4℃)EC3.2.1.22
注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研