參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 |
豬藍(lán)耳病病毒PCR試劑盒熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015272 |
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關(guān)說明書;陽性質(zhì)控品及陰性質(zhì)控品無需提取,可直接使用。
2. 擴(kuò)增試劑準(zhǔn)備(PCR前準(zhǔn)備區(qū))
取N個(gè)(N=陰性質(zhì)控品+待檢樣本+陽性質(zhì)控品)PCR反應(yīng)管,每管分別加入FMD RT-PCR反應(yīng)液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據(jù)每頭份用量計(jì)算N+1份FMD RT-PCR反應(yīng)液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個(gè)PCR反應(yīng)管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應(yīng)液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應(yīng)管于6,000rpm離心30s,轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應(yīng)管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
CM-H011人肺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL甲基帕羅西汀質(zhì)量規(guī)格:>99%N-Methyl Paroxetine
CD55 Others Mouse 小鼠 CD55 / DAF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 硫酸頭孢喹諾質(zhì)量規(guī)格:干品Cefquinome>80%,BRCefquinome sulfate
胰蛋白酶-EDTA(含100mL酶解緩沖液) 10mL吡羅昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Piroxicam
TT人甲狀腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 TT human thyroid duct carcinoma cells F-12K+10%FBS泊沙康唑質(zhì)量規(guī)格:>99%Posaconazole
IL21
Protein Canine 重組狗 IL21 / Ierleukin 21 蛋白泊沙康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Posaconazole
NA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1酸腺嘌呤,維生素B4質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRAdenine phosphate
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRHypoxanthine
TE-10細(xì)胞,食管癌細(xì)胞 人食管癌細(xì)胞,TE-10細(xì)胞 敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21鳥嘌呤 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRGuanine
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-B5鳥嘌呤 (標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Guanine
PDGFRA
Others Human 人 PDGFRa / CD140a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 6-姜1酚(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品6-Shogaol
豬藍(lán)耳病病毒PCR試劑盒熒光PCR檢測試劑盒CNE細(xì)胞,鼻咽癌細(xì)胞 人胚肺成纖維細(xì)胞,HFL-I細(xì)胞 原代骨骼肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/100ml嶙酸二氫鈣,英文名或英文縮寫:Calcium hypophosphite,級別:AR,99%,規(guī)格:1克
豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL32-去氧-D-葡萄糖 2-Dqoxy-D-glucosq 124-17-6
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 金絲雀黃O,英文名或英文縮寫:Aunemine O,級別:CP,99.5%,規(guī)格:100毫克
CL-0329Chang liver (CCL13) (人張氏肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2胰酶粉100克
CNDP1
Others Mouse 小鼠 CNDP1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 89-25-83-甲基-1-本基-2-吡唑啉-5-酮;1-本基-3-甲基-5-吡唑啉酮;本基甲基氮茂-5-酮3-metxyl-1-pxenyl-2-pyrazolin-5-one;1-pxenyl-3-metxyl-5-pyrazolone;3-metxyl-1-pxenyl-5-pyrazolone
注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。產(chǎn)品僅用于科研