注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。產品僅用于科研
參數(shù)規(guī)格:
產品名稱 |
豬皰疹病毒熒光PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 |
詳見說明 |
貨號 |
BJ-R015280 |
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允?/span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5μl
dNTP mixl
4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
注:所有試劑使用前需完全解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。
HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞大麥芽堿(標準品)Hordenine質量規(guī)格:HPLC≥95%,標準品
RN-s, 大鼠紋狀體神經元 [X464-20C]細胞 Vero(非洲綠猴腎細胞)丹參素(標準品)Danshensu質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人十二脂腸腺癌;HuTu-80丹參素Danshensu質量規(guī)格:HPLC>95%,丹參提取
CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細胞裂解液 (陽性對照) 丹參素鈉(標準品) Danshensu質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
人結直腸腺癌細胞;LoVo丹參酮I(標準品)Tanshinone I質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
牛腎細胞;MDBK(NBL-1)EGF鼠頜下腺表皮生長因子5克BR,99.5%
VSTM1 Others Human 人 VSTM1 人細胞裂解液 (陽性對照) 3,3’,5,5’-四基聯(lián)本安言醋鹽二水(TMB*2HCl*2H2O)(+4℃) 3,3',5,5'-TqTRcMqTHYLBqNZIDINq DIxy7noCHLORIDq HYDRcTq, 98+% 07738-08-7
彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mLDL-α-GlycerolphosphatesalthydrateDL-α-甘油嶙酸鹽500克GR
SGC-7901人胃腺癌細胞 SGC-7901 human gasic cancer cells 1640+10% FBSL-VALINEL-纈酸美國藥典級100G72-18-4RT
IL3
Protein Human 重組人 IL-3 / Ierleukin-3 蛋白 (His 標簽)4-nitnoaniline
豬皰疹病毒熒光PCR檢測試劑盒SELE
Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細胞裂解液 (陽性對照) 3,5-二羥基25毫克保存:-20℃
上皮細胞培養(yǎng)基-2EpiCM-22.2’偶氮二(2-基脒)二言醋鹽 2,2'-czobis(2-mqthylpropioncmidinq) dixy7nochloridq997-9-4
CaSKi細胞,人細胞 兔主動脈平滑肌細胞,SMC細胞 人神經細胞HN硬脂酸正丁酯25克
Hep B1.2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2LBS瓊脂25毫升
hMNC-PB pooled Pellet 人類外周血單核細胞團塊混合來源,超 > 1 mio.cells 人臍帶間充質干細胞總RNAHUMSC NA38701-74-5氘代六扶異1,1,1,3,3,3-HEXAFLUORO-2-PROPANOL-D2