PCR常用監(jiān)測(cè)污染?對(duì)照試驗(yàn)
一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室,要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測(cè),考慮有無污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。常用監(jiān)測(cè)污染對(duì)照試驗(yàn):
一、陽性對(duì)照:
在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對(duì)照,它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好,經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本,如以重組質(zhì)粒為陽性對(duì)照,其含量宜低不宜高(100個(gè)拷貝以下)。但陽性對(duì)照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽性標(biāo)本,其對(duì)檢測(cè)或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定,檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時(shí),在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽性對(duì)照。
二、陰性對(duì)照:
每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對(duì)照。它包括:
1.標(biāo)本對(duì)照:被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對(duì)照;被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照。
2.試劑對(duì)照:在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以監(jiān)測(cè)試劑是否污染。
三、重復(fù)性試驗(yàn)。
四、選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。