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PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析
日期：2024-11-22 13:14
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摘要：
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析：
1、酶量過高。減少酶量；酶的質(zhì)量差，調(diào)換另一來源的酶。
2、dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。
3、MgCl2濃度過高?？蛇m當(dāng)降低其用量。
4、模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng，而基因組DNA則應(yīng)<200ng。
5、引物濃度不夠優(yōu)化。對引物進(jìn)行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng)
6、循環(huán)次數(shù)過多；增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30，縮短退火時(shí)間及延伸時(shí)間，或改用二種溫度的PCR循環(huán)。
7、退火溫度過低。
8、電泳體系有問題：①凝膠中...
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散分析：
1、酶量過高。減少酶量；酶的質(zhì)量差，調(diào)換另一來源的酶。
2、dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。
3、MgCl2濃度過高?？蛇m當(dāng)降低其用量。
4、模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng，而基因組DNA則應(yīng)<200ng。
5、引物濃度不夠優(yōu)化。對引物進(jìn)行梯度稀釋重復(fù)PCR反應(yīng)
6、循環(huán)次數(shù)過多；增加模板量減少循環(huán)次數(shù)至30，縮短退火時(shí)間及延伸時(shí)間，或改用二種溫度的PCR循環(huán)。
7、退火溫度過低。
8、電泳體系有問題：①凝膠中緩沖液和電泳緩沖液濃度相差太大；②凝膠沒有凝固好；③瓊脂糖質(zhì)量差。
9、若為PCR試劑盒則可能：①由于運(yùn)輸儲(chǔ)存不當(dāng)引起試劑盒失效；②試劑盒本身質(zhì)量有問題，如引物選擇、循環(huán)參數(shù)等選擇不當(dāng)。
10、降解的陳舊模板擴(kuò)增也易產(chǎn)生涂布。